可變性腦膜炎奈瑟菌診斷血清

廣州健侖生物科技有限公司

【儲藏條件】

2~8℃避光保存，在標明的有效期內(nèi)使用。

【有效期】

24個月

【產(chǎn)品名稱】

通用名：腦膜炎奈瑟菌診斷血清英文名：antisera for N.meningitidis

【產(chǎn)品說明】

本套血清用于A、B、C、W、X、Y等6個常見血清QUN（serogroup）腦膜炎奈瑟菌的血清群鑒定，將相應血清群腦膜炎奈瑟菌制備滅活抗原，免疫家兔所得，血清產(chǎn)品經(jīng)免疫吸附去除了非特異性凝集成分，具有效價高，特異性強的特點。

可變性腦膜炎奈瑟菌診斷血清

【規(guī)格】

每種血清群1瓶，每瓶2ml，均為使用液。

【使用方法】

1.產(chǎn)品在使用前，由冰箱拿出，恢復溫度到室溫后使用。

2.樣品分離培養(yǎng)物，經(jīng)鏡檢和生化鑒定，確定為腦膜炎奈瑟菌后，再進行血清分群檢測，如果未能確定為腦膜炎奈瑟菌，不宜直接進行血清凝集檢測，以免產(chǎn)生假陽性結(jié)果。

3.待鑒定細菌在血平板或巧克力平板上，5% CO₂，培養(yǎng)48小時。

4.用酒精擦拭玻璃片。

5.用蠟筆或防水筆將玻璃片分為8個方格。

6. 在玻片每個方格的下半部分，用移液器加5%的福爾馬林溶液（基于生物安全目的）。

7. 用無菌或一次性10μl接種環(huán)挑取BAP平板上過夜培養(yǎng)的細菌菌落。

8. 在玻片上將細菌與5%的福爾馬林溶液混勻，混勻后的液體應該不透明，在加抗血清前應保持細菌懸液不干燥。

9. 在玻片的上方加10μl血清群特異的抗血清，同時在陰性對照側(cè)加BS或者生理鹽水。

10. 緩慢的混合細菌懸液和抗血清，使上部的抗血清和下部的細菌懸液充分混合1-2分鐘。不要做旋轉(zhuǎn)晃動，以免不同血清群的血清會相互混合污染。

11.在燈光下，黑暗背景條件下觀察結(jié)果。1-2分鐘內(nèi)呈2+及以上凝集現(xiàn)象為陽性，1-2分鐘內(nèi)呈現(xiàn)2+以下凝集現(xiàn)象為陰性。如果過了2分鐘，才發(fā)生的凝集反應按陰性處理。

【凝集反應的強度等級】

當抗血清與細菌接觸，會引起凝集反應，使細胞（細菌）凝集或呈簇，細胞（細菌）上清液變得清亮，細胞懸液濃度或使用的抗血清濃度不同，會產(chǎn)生不同的強度的凝集反應，見圖示

4+ 所有的細胞都發(fā)生凝集，細胞懸液清亮。

3+ 75%的細胞發(fā)生凝集，細胞上清略微渾濁不清。

2+ 50%的細胞發(fā)生凝集，細胞上清略微渾濁不清。

1+ 25%的細胞發(fā)生凝集，細胞上清略微渾濁不清。

+/- 少于25%的細胞發(fā)生凝集，可見有顆粒狀的成分。

0 沒有肉眼可見的凝集，上清懸液渾濁、平滑。

【血清群確定】

1. 1-2分鐘內(nèi)，出現(xiàn)3+或4+凝集為陽性反應（強陽性反應）。對于B群腦膜炎奈瑟菌來說，如果出現(xiàn)2+及以上的凝集則可認為陽性。

2. 陰性反應是+/-、1+ 或 2+（弱凝集）的凝集程度。

3. 當菌株僅與一種抗血清出現(xiàn)凝集，但和生理鹽水不凝集時才能鑒定為該種血清型。

4. 如果不能確定血清群，菌株記為不能分群腦膜炎奈瑟菌（NG）。

5. 關(guān)于不能分群腦膜炎奈瑟菌（NG）菌株。

6. 在生理鹽水中凝集，無論與任何抗血清發(fā)生強反應，都應標記為自凝菌。

7. 在生理鹽水中不自凝，和多種血清出現(xiàn)凝集，記為NG。

8. 不和生理鹽水凝集，也不和任何一個血清凝集也記作NG。

【結(jié)果難以判斷時解決方案】

腦膜炎奈瑟菌具有可變性（有莢膜與無莢膜，小菌落與大菌落，慢生長與快生長，強凝集與弱凝集），有時候很難清除解釋結(jié)果，一些建議如下：

1. 挑取同一平板上的另一個細菌克隆進行重復凝集試驗。

2. 如果玻片上的結(jié)果不明確，將試管中配置懸液，重復該試驗。

3. 加20µl抗血清直接涂于玻片上，直接加一環(huán)細菌進行混均凝集。

4. 再次培養(yǎng)，第二天進行重新試驗。

5. 如果當天的平板上有各種大小不一的菌落，每種菌落再次分離純培養(yǎng)，第二天每種菌落進行試驗。大菌落一般會有比較好的凝集反應，小菌落次之。

6. 如果試驗中的問題還是不能解決，應當和對照菌株同時進行試驗，確保試劑的正確性。

【血清質(zhì)量控制】

在對未知的菌落進行血清分群之前，應選用一套腦膜炎奈瑟菌參考菌株（A, B, C, W, X, Y）和一株可分群的腦膜炎奈瑟菌進行質(zhì)量控制檢測。操作步驟：

1. 新購進的每一批次抗血清要用參考菌株進行檢測。

2. 半年后重復質(zhì)量控制檢測

3. 如果血清管暴露于超過4℃環(huán)境，或者懷疑血清被污染時，也要對血清進行重新的質(zhì)量控制。

4. 關(guān)于血清分群和質(zhì)量控制，每一批次的抗血清需要使用所有的參考菌株進行實驗室驗證，記錄質(zhì)量控制驗證結(jié)果。

【血清質(zhì)量控制檢測結(jié)果判讀】

1. 通過質(zhì)量控制檢測

與同源性的抗原反應，1-2分鐘內(nèi)，出現(xiàn)3+或 4+程度的凝集；單一血清群的抗血清不與其他血清群的腦膜炎奈瑟菌反應，不與NG菌株凝集反應，鹽水不自凝。

2. 分群血清質(zhì)量控制檢測失敗

如果抗血清與一種或多種參考菌株凝集反應，或/和NG參考菌株反應，鹽水自凝，則血清不能使用。

【其他所需材料】

潔凈玻片、生理鹽水（0.85%的氯化鈉溶液）、5%的福爾馬林溶液、接種環(huán)或移液器。

【注意事項】

1. 本產(chǎn)品只能作為腦膜炎奈瑟菌血清型判定的輔助方法，zui終的判定需形態(tài)學、生化方法和血清學方法共同進行。

 2. 本產(chǎn)品應避免冷凍。反復凍融會使血清產(chǎn)生沉淀。

3. 本產(chǎn)品在保存過程中可能會產(chǎn)生渾濁或沉淀，這并不表示該產(chǎn)品已被污染。離心或者過膜去掉渾濁或沉淀后，可以正常使用。

4. 本產(chǎn)品含有0.1%*作為防腐劑，丟棄時需倒入下水管，并用大量的水沖洗下水管。

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該菌的感染力在抗體和血清補體存在下大大提高（但并非需

要兩者存在）。該菌會因噬菌作用被偽足包裹進入巨噬細胞，之

后，菌體被細胞產(chǎn)生的自噬體包裹起來，這卻阻止了溶酶體的溶

解。在這層保護之下，細菌大量繁殖。該菌利用一種型為IVB的分

泌系統(tǒng)分泌的名為Dot/Icm（細胞器運行缺失/細胞內(nèi)繁殖）宿主

入侵效應蛋白。這些效應器可以提升細菌在宿主細胞的存活力。

該菌會在培養(yǎng)液里由II型分泌系統(tǒng)產(chǎn)生一種大小約為39kDa的金屬

蛋白，這種蛋白對某些組織培養(yǎng)的細胞有毒害。II型分泌系統(tǒng)也

是*毒化作用的必需。[1]
1976年，美國賓夕法尼亞州的費城舉辦了一次退伍軍人會議，參

加者中超過200人發(fā)生肺炎，其中34人遇難。經(jīng)查明，這次事件的

元兇是一種當時尚未發(fā)現(xiàn)的細菌——嗜肺軍團菌（該病也因此命

名為軍團病）。這次事件反映了嗜肺軍團菌并非小面積的人與人

的傳染。
2004年，三種類型的嗜肺軍團菌的基因序列已被成功測定，這為

從分子生物學層次了解嗜肺軍團菌及軍團菌屬鋪平道路。對180種

嗜肺軍團屬的DNA序列改變的基因比對檢測證實了其基因具有高塑

性以及頻繁的突變頻率。更詳細的有關(guān)其生活周期的資料是來自

于對生活在其自然宿主——卡氏棘阿米巴之中的嗜肺軍團菌的基

因表達分布的研究。研究發(fā)現(xiàn)了嗜肺軍團菌的生活周期分為兩段

，而且深入研究了其可感染、可復制的特性。
1.    一般取下呼吸道分泌物、肺活檢組織或胸前積液等標本

進行細菌學檢查。
2.    用BCYE培養(yǎng)基分離細菌，再根據(jù)肺炎特性、菌落特征、

生化反應作出鑒定，但往往結(jié)果出現(xiàn)較晚。
現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)嗜肺軍團菌有15個血清型。其中，嗜肺軍團菌血清1型（

Lp1）與人類疾病關(guān)系zui密切，其次為血清4型（Lp4）和6型

（Lp6）。關(guān)于血清凝集法用的診斷血清方面，推薦天津生物芯片

生產(chǎn)的嗜肺軍團菌全套診斷血清產(chǎn)品。
3.    可將標本用一只熒光標記抗體進行直接熒光實驗，既特

異又可做出快速診斷。

The bacterial infectivity is greatly increased (but not absoluy necessary) in the presence of antibodies and serum complement

Want both to exist). The bacteria will be pseudopodia due to phagocytic parcel into macrophages

After that, the cells are surrounded by autophagosomes that are produced by the cells, which prevent the lysosomal dissolution

solution. Under this layer of protection, bacteria multiply. The strain utilizes a fraction of IVB type

The secreted system is called Dot / Icm (organelle missing / intracellular reproductive) host

Invasive effect protein. These effectors increase the viability of bacteria in host cells.

The bacterium produces a size of about 39 kDa metal from the type II secretion system in the culture broth

Proteins, which are toxic to some tissue-cultured cells. Type II secretion system also

It is necessary for complete poisoning. [1]
In 1976, a veteran's conference was held in Philadelphia, Pennsylvania, United States

More than 200 people were pneumonia, of which 34 were killed. After investigation, this incident

The culprit is a kind of bacteria not found at that time - Legionella pneumophila (the disease is therefore life

Named Legionella). This incident reflects that Legionella pneumophila is not a small area of ??people and people

Infection.
In 2004, three types of Legionella pneumophila gene sequences have been successfully measured, which is

Understanding of Legionella pneumophila and Legionella from the molecular biology level Pave the way. Of 180 species

The gene alignment of the L. pneumophila gene sequence alignment confirmed that the gene is highly plasticized

Sexual and frequent mutation frequency. More detailed information about its life cycle comes from

Legionella pneumophila on living in its natural host, Amorpha

Study on the distribution of expression. The study found that Legionella pneumophila life cycle is divided into two sections

, But also in-depth study of its infectivity, replicable features.
1. General removal of respiratory secretions, lung biopsy or chest fluid and other specimens

Bacteriological examination.
2. With BCYE medium to separate bacteria, then according to pneumonia characteristics, colony characteristics,

Biochemical reactions were identified, but the results often appear later.
Legionella pneumophila has been found in 15 serotypes. Among them, Legionella pneumophila serotype 1 (

Lp1) is most closely related to human diseases, followed by serotypes 4 (Lp4) and 6

(Lp6). About the diagnostic serum used for the serum agglutination method, Tianjin Biochip is recommended

Legionella pneumophila production of a full set of diagnostic serum products.
3. Specimens can be fluorescently labeled with a fluorescent direct fluorescence test, both special

Different and can make rapid diagnosis.